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分光光度计的仪器组成与光谱范围

发布时间:2016-05-27 点击量:468
        分光光度计的光度定义 
  
  分光光度法是在特定波长处或一定波长范围内光的吸收度,对该物质进行定性或定量分析。常用的波长范围为:(1)200~380nm的紫外光区,(2)380~780nm的可见光区,(3)2.5~25μm(按波数计为4000cm<-1>~400cm<-1>)的红外光区。所用仪器为紫外分光光度计、可见光分光光度计(或比色计)、红外分光光度计或原子吸收分光光度计。为保证测量的精密度和准确度,所有仪器应按照国家计量检定规程或本附录规定,定期进行校正检定。
  
  分光光度计的仪器组成 
  
  分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白。
  
  定量以及细菌生长浓度的定量。
  
  仪器主要由光源、单色器、样品室、检测器、信号处理器和显示与存储系统组成。
  
  分光光度计的光谱范围
  
  包括波长范围为400~760 nm的可见光区和波长范围为200~400 nm的紫外光区.不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。
  
  钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的400~760nm波长的光谱光通过三棱镜折射后,可得到由红橙,黄绿,蓝靛,紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源。
  
  
  氢灯(或氘灯)的发射光谱:氢灯能发出185~400 nm波长的光谱可作为紫外光光度计的光源。
  
  物质的吸收光谱(1)
  
  如果在光源和棱镜之间放上某种物质的溶液,此时在屏上所显示的光谱已不再是光源的光谱,它出现了几条暗线,即光源发射光谱中某些波长的光因溶液吸收而消失,这种被溶液吸收后的光谱称为该溶液的吸收光谱。
  
  不同物质的吸收光谱是不同的.因此根据吸收光谱,可以鉴别溶液中所含的物质。
  
  物质的吸收光谱(2)
  
  当光线通过某种物质的溶液时透过的光的强度减弱.因为有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被组成此溶液的物质所吸收只有一部分光可透过溶液。
  
  入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透过光。
  
  如果我们用蒸馏水(或组成此溶液的溶剂)作为"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的损失则:
  
  入射光 = 吸收光 十 透过光
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